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Gibson assemblyEdit

Gibson assembly 는 DNA assembly 방법 중 다양한 DNA 조각의 결합을 한 번의, 단일 온도에서의 반응으로 진행하는 방법이다. 이는 Daniel Gibson이 2009년 그가 J.Craig Venter Institute 에서 근무할 때 발명되었다.

ProcessEdit

Gibson assembly.jpg

Gibson assembly

전체적인 Gibson assembly 반응은 비교적 적은 양의 요소와 조작을 필요로 한다.

10개 이상의 DNA 조각을 서열의 특징에 따라 동시에 합성할 수 있다. 인접한 DNA 조각과 서로 겹치는 20-40개의 base pair 가 필요하며. 이 DNA 조각들은 exonuclease , DNA polynerase 와 DNA ligase 를 필요로 한다.

  • exonuclease가  5' 말단부터 DNA를 씹어먹고, 결과적으로 생긴 한 가닥의 DNA만 남아있는 부분이 인접한 DNA 조각과 서로 annealing 된다.
  • DNA polymerase가 빈 부분을 뉴클레오타이드로 채운다.
  • DNA ligase 가 인접한 조각을 공유 결합으로 묶으며, DNA 조각의 결함(Nick)을 제거한다.

전체적인 혼합 과정은 섭씨 50도에서 1시간동안 진행된다. 결과물은 하나로 조합된 DNA 조각이다.

Gibson assembly 의 이점Edit

  •  더 적은 단계와 시약이 필요하기 때문에 기존의 cloning 방법보다 간단하다. 시간 또한 적게 걸린다.
  • 다양한 DNA 조각이 하나의 튜브 안에서 동시에 합성될 수 있다.
  • 두가지 DNA 사이의 restriction site scars가 전혀 남지 않는다.

ReferencesEdit

1. Gibson DG, Young L, Chuang RY, Venter JC, Hutchison CA 3rd, Smith HO. (2009). "Enzymatic assembly of DNA molecules up to several hundred kilobases". Nature Methods 6 (5): 343-345

2. Gibson DG. (2011). "Enzymatic assembly of overlapping DNA fragments". Methods in Enzymology498: 349–361.

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